Приглашаем посетить сайт
ОПТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Опти́ческие ме́тоды иссле́дования, методы анализа веществ, основанные на изучении их оптических свойств. К О. м. и. относятся: фотометрические методы, нефелометрия и турбидиметрия, рефрактометрия, поляриметрия, спектральный и люминесцентный анализы.
К фотометрическим методам относят спектрофотометрию и фотоколориметрию, основанных на измерении поглощения света определяемым веществом в видимой, ультрафиолетовой и инфракрасной областях спектра. Фотометрические (абсорбционные) методы основаны на избирательном поглощении света исследуемым веществом и подчиняются закону Бугера—Ламберта—Бера (поглощение света пропорционально концентрации поглощающего вещества и толщине поглощающего слоя). При фотометрических методах анализ проводят по поглощению моно-хроматического света. Спектрофотометрия — один из наиболее точных фотометрических методов анализа, применяемых в биохимии. Её используют для количеств, определения (с большой точностью): белков, нуклеиновых кислот, витамина А, НАД, НАДФ, 17-оксикортикостероидов в моче и плазме крови; при изучении многих ферментов. В биохимических исследованиях применяются специальные приборы — спектрофотометры типов СФ-4А, СФ-16 и др. Фотоколориметрию используют при исследовании ферментов (кишечная щелочная фосфатаза, альдолаза и трансаминазы сыворотки, (3-глюкуронидаза и др.), глюкозы, аминокислот, белков, фосфора, железа и др. В биохимических лабораториях чаще пользуются фотоэлектроколориметрами типа ФЭК-М и др., а также фотоэлектрическими фотометрами, снабжёнными светофильтрами.
В основе нефелометрии и турбидиметрии лежит явление рассеяния или поглощения света твёрдыми или коллоидными частицами, находящимися в растворе. Нефелометрия основана на измерении интенсивности светового потока, рассеянного твёрдыми частицами, находящимися в растворе; турбидиметрия — на измерении ослабления интенсивности светового потока, прошедшего через раствор, содержащий твёрдые частицы (интенсивность уменьшается вследствие поглощения и рассеяния светового потока). Нефелометранализ осуществляют с помощью фотоэлектрических колориметров-нефелометров типов ФЭК-Н-57, ФЭК-56 и др. В качестве турбидиметров могут быть использованы колориметры. Нефелометрические методы используют для определения малых концентраций веществ в растворе: ртути, мышьяка, сурьмы, серы.
Спектральный анализ — качественный и количественный анализ состава вещества, основан на исследовании его оптических спектров. Различают атомный, эмиссионный, спектральный (по оптическим спектрам испускания атомов), атомно-абсорбционный (по оптическим спектрам поглощения атомов) анализы. Качественный анализ производят по положению спектральных линий, количественный — по их интенсивности. В ветеринарных исследованиях для изучения содержания ионов металлов и солей в организме широко применяют спектрографы (ИСП-28, ИСП-51 и др.), регистрирующие спектры на фотоплёнке и различающиеся разрешающей способностью, а также атомные абсорбционные спектрофотометры (модель 207, Япония) для определения концентрации Ca, Cu, Fe, К, Mg, Na, Pb, Zn в жидкостях и тканях организма. В биохимических исследованиях применяют и рентгеноспектральный анализ (по рентгеновским спектрам).
Люминесцентные методы анализа состава вещества основаны на люминесценции — свечении под воздействием облучения светом, электронами, в результате химических реакций и т. д. В зависимости от длительности свечения различают флюоресценцию и фосфоресценцию. Количественный анализ осуществляют на основе зависимости интенсивности флюоресцентного излучения от концентрации вещества. Флюоресцентное излучение, измеряемое специальными приборами — флюорометрами ФМ-1 и электронным флюорометром ЭФ-ЗМ, используют для количеств, определения витаминов B1, B2, фолиевой кислоты, гетероауксина, адреналина, стероидных гормонов, кодегидрогеназ, триптофана, антибиотиков (ауреомицинов), жёлчных кислот, жиров, порфиринов и др., а также некоторых лекарственных веществ. Свежесть мяса и рыбы можно определить специальным флюорометром. Флюоресцентные спектрофотометры (модель МПФ-2А и модель 203, Хитати, Япония) позволяют исследовать аминокислоты, амины, витамины, стероиды, пуриновые и пиримидиновые основания и др. метаболиты. Применяется также так называемый сортовой люминесцентный анализ, отделяющий внешне похожие разные объекты (например, нормальные клетки от опухолевых).
Литература:
Ляликов Ю. С., Физико-химические методы анализа, 4 изд., М.—Л., 1964;
Кармолиев Р. X., Современные биохимические методы исследования в ветеринарии и зоотехнии, М., 1971.